Espectrofotometría UV-Visible: calibración, validación e incertidumbre para resultados trazables

Curso técnico asincrónico · 8 horas

Espectrofotometría UV-Visible: calibración, validación e incertidumbre para resultados trazables

El instrumento entrega una absorbancia. Lo que su laboratorio informa es una concentración con una incertidumbre asociada, y entre una cosa y la otra hay una curva de calibración que alguien ajustó, un intervalo de trabajo que alguien decidió, un sesgo que alguien midió y una carta de control que alguien vigila. Este curso construye esas cuatro piezas sobre un mismo método, de principio a fin.

¿Qué aprenderá?

• Elegir el intervalo de absorbancias de trabajo con el argumento de propagación del error, y reconocer por qué una lectura de 1,8 y una lectura de 0,05 no merecen la misma confianza aunque el equipo informe las dos con tres decimales.
• Separar calibración, verificación y ajuste como tres operaciones con evidencia documental distinta, y redactar el protocolo de verificación del desempeño del espectrofotómetro con sus patrones, su frecuencia, su criterio y la acción que corresponde cuando el criterio no se cumple.
• Establecer experimentalmente las características de desempeño del método: linealidad juzgada por el gráfico de residuos y no por el coeficiente de determinación, límite de detección y de cuantificación, precisión, veracidad y recuperación.
• Detectar un efecto de matriz mediante adición de patrón, decidir entre calibración externa y adición, y comprender qué consecuencia tiene esa decisión sobre el alcance declarado del método.
• Evaluar la incertidumbre del resultado por las tres vías habituales, ascendente, descendente y a partir de datos de validación, comparar lo que cada una arroja sobre el mismo método y decidir qué componente conviene atacar primero.
• Diseñar la carta de control del método, aplicar las reglas de decisión sobre ella y ejecutar una secuencia ordenada de diagnóstico cuando un control cae fuera de criterio, incluida la decisión sobre los resultados ya informados.

Un solo método, de principio a fin

Todo el curso trabaja sobre la determinación de hierro disuelto en agua con 1,10-fenantrolina, con lectura a 510 nm. Las ocho series de datos que se analizan corresponden a ese método y reaparecen módulo tras módulo: la curva de calibración del módulo 3 es la que se usa para calcular el límite de cuantificación, la recuperación del módulo 3 es la que entra en el presupuesto de incertidumbre del módulo 4, y ese presupuesto es el que fija los límites de la carta de control del módulo 5. El participante no resuelve diez ejercicios sueltos, construye un expediente.

Cada bloque incluye un ejercicio de aplicación con su resolución desarrollada y una ampliación optativa de mayor complejidad, también resuelta. Quien tenga laboratorio propio puede resolver los ejercicios del módulo 4 y del módulo 5 sobre su propio método, y llevarse el trabajo hecho.

Programa

1. Fundamentos de la técnica. Transiciones electrónicas y grupos cromóforos, transmitancia y absorbancia, ley de Beer-Lambert y sus condiciones de validez, desviaciones de la linealidad por causa química e instrumental, componentes del equipo, cubetas, y la ubicación de la técnica frente a la fluorescencia y al infrarrojo.
2. Calibración y verificación del instrumento. Calibración, verificación y ajuste como operaciones distintas con evidencia distinta, trazabilidad metrológica de la escala de longitud de onda y de la escala fotométrica, y diseño del protocolo de verificación del desempeño con sus cuatro parámetros.
3. Validación del método analítico. Intervalo de trabajo y linealidad, límite de detección y de cuantificación, precisión en sus condiciones de repetibilidad y precisión intermedia, veracidad y recuperación, selectividad, interferencias y efectos de matriz resueltos por adición de patrón.
4. Incertidumbre de la medición. Especificación del mensurando, diagrama causa-efecto, conversión de tolerancias a incertidumbre típica, y las tres vías de cuantificación aplicadas al mismo método con la comparación de sus resultados.
5. Aseguramiento de la validez de los resultados. Controles internos, construcción e interpretación de la carta de control, reglas de decisión, y la secuencia de diagnóstico y acción ante un resultado fuera de criterio.
6. Caso integrador. Un laboratorio de aguas incorpora el método para un cliente que fija una incertidumbre expandida máxima, y el caso recorre cinco etapas hasta el primer desvío de la carta de control.
7. Trabajo final. Expediente metrológico de un método espectrofotométrico, corregido por el tutor.

Incluye

• Material de estudio autosuficiente, sin necesidad de comprar norma alguna para cursar.
• Diez lecturas con tablas y figuras propias, y diez ejercicios de aplicación con la solución desarrollada, cada uno con su ampliación optativa también resuelta.
• Ocho series de datos numéricos trabajadas a lo largo del curso, con los cálculos reproducidos paso a paso.
• Cinco autoevaluaciones de diez preguntas, de intentos ilimitados, con explicación de cada opción, se haya acertado o no.
• Caso integrador y trabajo final corregido por el tutor.
• Consultas técnicas sobre los contenidos desarrollados.
• Certificado digital según el cumplimiento de los criterios de aprobación.

La calificación final se compone de cinco autoevaluaciones de 12 puntos y un trabajo final de 40, sobre un total de 100. Se aprueba con 60.

A quién está dirigido

A dos perfiles que suelen convivir en el mismo laboratorio. El analista que se incorpora a la técnica y necesita entender qué ocurre dentro del equipo antes de confiar en el número que sale. Y el operador que lleva años midiendo absorbancias sin haber calibrado, validado ni evaluado la incertidumbre del método que ejecuta.

Cada bloque lleva un recuadro diferenciado para cada perfil: uno resume lo que el operador con experiencia ya domina y lo remite directamente al contenido que le resulta nuevo, y otro antepone la definición mínima y el ejemplo elemental para quien aborda el concepto por primera vez. Nadie tiene que leer lo que ya sabe ni tropezar con lo que nunca vio.

Cómo se relaciona con otros cursos del catálogo

Este curso es autosuficiente y no exige haber tomado ningún otro. Para quien trabaje con instrumentación cromatográfica o de absorción atómica, el tratamiento metrológico equivalente sobre esas técnicas está en Metrología y Cálculo de Incertidumbre para HPLC y Espectroscopía de Absorción Atómica.

Quien busque el tratamiento general de la validación, sin anclaje en una técnica instrumental particular, lo encontrará en Interpretación de la Guía Eurachem para Validación de Métodos Analíticos.

Fuentes. Los criterios de validación siguen la guía Eurachem sobre aptitud de los métodos analíticos en su edición 2025. El tratamiento de la incertidumbre se apoya en las guías Eurachem/CITAC QUAM:2012 y en la guía sobre incertidumbre a partir de datos de validación y de control de calidad de 2026. La terminología metrológica sigue el VIM (JCGM 200:2012) y los requisitos de gestión se citan por numeral de ISO/IEC 17025:2017, parafraseados.

Importante. El curso no transcribe valores numéricos de aceptación tomados de normas de acceso pago. Toda cifra que aparece se presenta como criterio interno propuesto, acompañada de la condición que la sustenta y de la indicación de dónde tomar el valor vigente del ejemplar del laboratorio.

Alcance. Capacitación técnica. No habilita, no acredita, no certifica competencia profesional ni sustituye requisito regulatorio alguno. La validación de un método y la calificación de un instrumento son responsabilidad del laboratorio que los ejecuta, y este curso provee los criterios para llevarlas adelante, no una constancia de haberlas realizado.

Explore la propuesta completa de capacitación técnica.

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